如何测量粗多糖的含量?用哪种仪器?
测量粗多糖的含量，用哪种仪器？本文将给出相应答案。粗多糖是从大豆籽粒中提取出的可溶性寡糖的总称。文章主要使用安徽赛科环保科技推荐使用的721-S型分光光度计来进行测量，原理是根据粗多糖在硫酸的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物。所以用分光光度法测定样品在粗多糖含量。理解了原理之后，我们就要做一些事先准备，如准备使用的试剂，如何测量，想好测量步骤，最后根据计算方法测得结果。
1）、准备使用的试剂
葡萄糖标准液：精确称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.1000g，置100mL容量瓶中加热蒸馏水溶解稀释至刻度，其浓度为1.0mg/mL，用稀释成浓度为0.1mg/mLd的标准工作液。
5%苯酚溶液：取苯酚100g，沙浴蒸馏，收集180℃-182℃溜分，称取此馏分5g，用水溶解后，定容至100mL棕色容量瓶中备用（现用现配）。
2）、测量步骤
①最大吸收波长的选择
精密吸取0.04mg/mL无水葡萄糖溶1.0 mL，置10mL具塞试管中，加入蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如加上法配制空白。用721分光光度计在470-510nm测定吸光度，测定最大吸收波长为490±nm。
②标准曲线的绘制
精密吸收浓度为0.1mg/mL的葡萄糖标准标准工作液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于10mL具塞试管中，各加蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0 mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如上法配制空白。用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。结果浓度在0.010-0.04mg/mL范围内与吸光度呈现性关系。
回归方程Y=7.52×10-3X+1.13×10-3, Y=0.9997(n=6)。
③测定含量
准备多糖的提取与精制取300mL，用氟仿多次萃取，以除去蛋白质，加活性炭1%脱色，抽滤，滤液加入95%乙醇，使含醇量达80%，静置过夜。过滤，残渣用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，真空干燥，即得粗多糖。精密称取粗多糖粉末0.2000g，置于50mL容量瓶中，定容，摇匀，即得供试品溶液。样品含量测定 精密度吸取供试品溶液2.0mL，按“标准曲线绘制”项和计算方式：多糖含量（%）=（C·D）/V×100测定吸光度。C－供试液葡萄糖浓度（mg/mL）；D－代试液的稀释因素；V－供试液体积（mL）。通过这样计算方法，利用721-S型分光光度计就可以测得结果了。721-S型分光光度计时本期推荐的一类产品，欢迎查阅。
1）、准备使用的试剂
葡萄糖标准液：精确称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.1000g，置100mL容量瓶中加热蒸馏水溶解稀释至刻度，其浓度为1.0mg/mL，用稀释成浓度为0.1mg/mLd的标准工作液。
5%苯酚溶液：取苯酚100g，沙浴蒸馏，收集180℃-182℃溜分，称取此馏分5g，用水溶解后，定容至100mL棕色容量瓶中备用（现用现配）。
2）、测量步骤
①最大吸收波长的选择
精密吸取0.04mg/mL无水葡萄糖溶1.0 mL，置10mL具塞试管中，加入蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如加上法配制空白。用721分光光度计在470-510nm测定吸光度，测定最大吸收波长为490±nm。
②标准曲线的绘制
精密吸收浓度为0.1mg/mL的葡萄糖标准标准工作液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于10mL具塞试管中，各加蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0 mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如上法配制空白。用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。结果浓度在0.010-0.04mg/mL范围内与吸光度呈现性关系。
回归方程Y=7.52×10-3X+1.13×10-3, Y=0.9997(n=6)。
③测定含量
准备多糖的提取与精制取300mL，用氟仿多次萃取，以除去蛋白质，加活性炭1%脱色，抽滤，滤液加入95%乙醇，使含醇量达80%，静置过夜。过滤，残渣用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，真空干燥，即得粗多糖。精密称取粗多糖粉末0.2000g，置于50mL容量瓶中，定容，摇匀，即得供试品溶液。样品含量测定 精密度吸取供试品溶液2.0mL，按“标准曲线绘制”项和计算方式：多糖含量（%）=（C·D）/V×100测定吸光度。C－供试液葡萄糖浓度（mg/mL）；D－代试液的稀释因素；V－供试液体积（mL）。通过这样计算方法，利用721-S型分光光度计就可以测得结果了。721-S型分光光度计时本期推荐的一类产品，欢迎查阅。
